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紫外检测仪使用方法

日期:2020-09-20 10:05
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摘要:

   复方头孢氨苄胶囊由头孢氨苄和甲氧苄啶两种成分制成,由于二者合用可双重阻断**在生长繁殖过程中细胞壁及菌体内核酸、蛋白质合成,从而显示较好的**作用,其**作用相当于倍量头孢氨苄。头孢氨苄(Cefalexin),***\β-内酰胺类\头孢菌素类。它能抑制细胞壁的合成,使细胞内容物膨胀至破裂溶解,杀死**。

本文用高效液相色谱法(HPLC法)测定复方头孢氨苄片中头孢氨苄的含量。

1 仪器与试剂

仪器:DIONEX P680AISO型高效液相色谱仪UVD17OUHPLC检测器梅特勒电子分析天平

试剂:甲醇(色谱纯、分析纯)、纯净水

标准对照样品:头孢氨苄对照品(中国药品生物制品检定所)

试验样品:头孢氨苄胶囊

2 试验过程

2.1  色谱条件与系统适应性实验

    用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱 Dikma Technologies DiamonsilTM C18, 5m, 250×4.6mm);水-甲醇-3.85%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液(700300153)为流动相;检测波长为254nm;理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500;流速:1 ml.min-1

2.2  对照品储备液的制备

     准确称取头孢氨苄对照液10 mg,置10 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液。

2.3  试验样品溶液的制备

     10个胶囊,准确称取质量,研细,精密称取适量(约相当于头孢氨苄0.1 g),置100 ml容量瓶中,加流动相适量,充分振摇使溶解,再加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液1 ml10 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

2.4  阴性空白溶液的制备

     按头孢氨苄胶囊的制备工艺制备缺主药的模拟胶囊,按照供试品溶液的制备项下所制备得出的溶液作为阴性空白溶液。

2.5  专属性试验

     在上述色谱条件下,分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性空白溶液各10 μl进样,记录色谱图,观察样品峰的保留时间是否有杂峰。

3  试验结果

3.1  仪器精密度试验

     精密量取对照品储备液1.0 ml 10 ml量瓶中,加流动相至刻度(即线性关系考察中的第三个对照品溶液),重复进样5次,每次10 μl,在上述色谱条件下进行分析,计算峰面积的RSD,要求RSD不大于2%

本实验采用对照品溶液(线性关系中第三个溶液)重复进样5次,进行仪器精密度的考察。实验结果显示,RSD值为1.13%,符合RSD小于2%的要求。证明仪器精密度良好。

3.2  方法重复性实验

     取主药粉末5份精密称定,按照供试品溶液的制备项,平行制备样品溶液5份,按样品测定方法测定,算出头孢氮苄峰面积的RSD

本实验共制备5份供试品溶液,各吸取10μL连续进样进行重复性试验。实验结果表明RSD值为8.44%,不符合RSD小于2%的要求,重复性实验较差。 说明在制备溶液过程中存在较大的操作偏差,而且在测定供试品色谱图时也存在操作不熟练或者不规范的现象以及进样误差等问题。在以后的试验中应该加以改正。

 3.3  线性关系考察

     依次精密量取对照品储备液0.2 ml0.5 ml1.0 ml1.5 ml 2.0 ml分别置于10 ml容量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,各进样10 μl,记录色谱图。以进样浓度(μg /ml)为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。以峰面积A对浓度C回归,得回归方程。所得标准曲线如下图:

结果表明,头孢氨苄浓度在20-200 μg/mL范围内与峰面积有良好线性关系,相关系数 r=0.9993

3.4  加样回收率试验

     采用加样回收法,精密称取 9 份已知含量的同批号头孢氨苄胶囊样品(约相当于头孢氨苄0.05 g)置于10 ml容量瓶中,精密称定,再分别精密称取头孢氨苄对照品0.625 g,置 25 ml 量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,分别精密量取 1 ml2 ml3 ml,各三份,加到上述供试品中,按供试品溶液的制备项操作制备溶液,按上述色谱条件测定,记录色谱图,按以下公式计算回收率:

回收率%=(测定平均值-本底量)/加入量×100%

其中本底量为加入流动相的量,加入量为加入对照品和供试品的量。

3.5  稳定性试验

    取同一供试品溶液,分别于02468 h进样,各进样10 μl,记录色谱图,峰面积若小于±1.0%,则样品溶液稳定性较好。

3.6  方法耐用性考察

    分别使用不同流动相组成、不同流动相pH值、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、不同柱温和不同流速等,对同一批样品进行测定,观察其结果是否一致。

3.7 样品含量测定

    分别取对照品溶液和供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积外标法计算含量。

本实验是利用外标法中标准曲线法对头孢氨苄胶囊中头孢氨苄的含量进行测定。此法优点在于不需要知道校正因子,只要被测组分全部出峰、无干扰、保留时间适 宜,就可以进行定量分析。而且操作简单、快捷,应用非常广泛。本次实验结果不是十分理想,说明在制备溶液过程中存在较大的操作偏差,而且在测定供试品色谱 图时也存在操作不熟练或者不规范的现象以及进样误差等问题。在以后的试验中应该加以改正。

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