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在实验室如何取得提取RNA(材料任选)

日期:2020-09-20 08:16
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摘要:

植物病毒的RNA提取:
大多植物病毒RNA为单链RNA,并且其极性与mRNA极性相同,植物病毒RNA提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 
  一、材料 
  提纯TMV病毒液(10mg/ml)。 
  二、设备 
  冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。 
  三、试剂 
  TE-饱和酚:氯仿(1:1),氯仿,3M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE缓冲液,无RNA酶的双菌水。 
  四、操作步骤 
  1、取一eppendorf管参入提纯TMV(10mg/ml)400ml,再参入等体积酚/氯仿,盖紧管盖后用手充分振荡1分钟,4℃下12000g离心10分钟。
  2、吸取水相于一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有机相交界面无蛋白为止。
  3、吸取水相于新eppendorf心管,参入等体积氯仿,用手倒置离心管数十秒,4℃下12000g离心10分钟。
  4、取水相,参入1/10倍体积的3mol/L NaAc(pH5.2),2.5倍体积的冰冷乙醇,混匀,-20℃30分钟。 
  5、4℃下12000g离心15分钟,小心弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀,4℃下12000g离心5分钟。
  6、小心弃去上清液,沉淀真空干燥5分钟或空气干燥10分钟,并溶于无RNA酶的双菌水或TE缓冲液中。
  7、取10ml运行电泳分析,另10ml用于cDNA合成。 
  [注意] 1、整个操作应尽可能在低温下运行。 
  2、由于病毒RNA镶嵌于外壳蛋白里面,因此要充分剥去病毒外壳蛋白,一般需要多次运行酚/氯仿的抽提。